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高效液相色譜法測(cè)定阿奇霉素干混懸劑含量

　　摘要目的：建立高效液相色譜法測(cè)定阿奇霉素干混懸劑含量。方法：采用Xbridge C18柱(150mm×2.1mm，5μm)，以0.025mol·L-1 的磷酸氫二鈉(pH 9.0)-乙腈(45：55)為流動(dòng)相，流速為0.35mL·min-1，柱溫為30℃，檢測(cè)長(zhǎng)為215nm。結(jié)果：線性范圍為467.70-1434.51µg·mL-1，r =0.999758，平均回收率(n=15)為99.9%(RSD=1.1%);本方法重復(fù)性和精密度良好(RSD<2.0%)。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于阿奇霉素干混懸劑的含量測(cè)定。

　　關(guān)鍵詞：阿奇霉素干混懸劑;高效液相色譜法;含量測(cè)定

　　Determination of azithromycin for suspension by HPLC

　　Abstract Objective To establish a high-performance liquid chromatography(HPLC) method for quantitative determination of Azithromycin for suspension.Methods:The column was Waters Xbridge C18(150mm×2.1mm,5μm).The mobile phase composed of 0.025 mol·L-1 Na2HP04(pH9.0)-acetonitrile(45：55).The flow rate was 0.35 mL·min-1 , and the column temperature was 30℃.The detection wavelength was 215nm. Results: The linear relationship of azithromycin was good in the range of 467.70-1434.51µg·mL-1,The average recovery(n=15) was 99.9% and RSD(n=15) was 1.1%;RSD of repeated experiment(n=15) was 0.6%;The repeatability and precision of the method were good (RSD<2.0%).Conclusion:This method is simple and believable with good repeatability.It can be effectively used for the quality control of azithromycin for suspension.

　　Key words:Azithromycin for suspension;HPLC;Quantitative Determination

　　阿奇霉素(azithromycin)是一種15元氮環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素[1]，其抗菌譜與紅霉素相似但抗菌作用更強(qiáng),突出的優(yōu)點(diǎn)是對(duì)堿穩(wěn)定，半衰期長(zhǎng)，有較高的生物利用度[2]，因此具有服藥方便，療程短，用藥量少，療效肯定等優(yōu)點(diǎn)，其制劑阿奇霉素干混懸劑在國(guó)內(nèi)外臨床已廣泛使用，本文參考有關(guān)文獻(xiàn)[4]、[5]、[6]，采用高效液相色譜法測(cè)定其含量，方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為阿奇霉素干混懸劑含量測(cè)定的方法之一。

　　1 儀器與試劑

　　海能LC7000液相色譜儀(LC7011 泵及LC7050自動(dòng)進(jìn)樣器，LC7020紫外檢測(cè)器);;梅特勒 XS105電子天平;色譜柱 Xbridge C18柱(150mm×2.1mm，5μm)。

　　阿奇霉素工作對(duì)照品(含量946μg·mg-1，批號(hào)：0601，齊魯制藥有限公司);阿奇霉素雜質(zhì)A工作對(duì)照品(含量95.4%，批號(hào)：aza060801，齊魯制藥有限公司);阿奇霉素干混懸劑(規(guī)格為100mg，批號(hào)：063070521、063070301、063070302，齊魯制藥有限公司);乙睛為色譜純，美國(guó)moker公司產(chǎn)品;水為純化水;其余試劑均為分析純。

　　2 色譜條件

　　色譜柱：Waters XbridgeC18柱(150mm×2.1mm，5μm);流動(dòng)相：0.025mol·L-1的磷酸氫二鈉(pH 9.0)-乙腈(45：55);流速：0.35mL·min-1;柱溫：30℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm;進(jìn)樣體積：20μL。

　　3 溶液制備

　　3.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱定阿奇霉素對(duì)照品25mg和阿奇霉素雜質(zhì)A對(duì)照品5mg，置同一25mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

　　3.2 供試品溶液的制備取阿奇霉素干混懸劑，求出平均裝量，將裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物混勻，精密稱取適量(約相當(dāng)于阿奇霉素25mg)，置25mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，作為供試品溶液。

　　4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

　　按上述色譜條件,進(jìn)樣對(duì)照品溶液20μL，結(jié)果理論塔板數(shù)按阿奇霉素峰計(jì)算不小于1500;阿奇霉素峰與阿奇霉素雜質(zhì)A峰分離度大于5.0;阿奇霉素峰的托尾因子不大于2.0，對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣主峰面積的RSD<2.0%(n=5)

　　5 線性關(guān)系試驗(yàn)

　　按對(duì)照品溶液阿奇霉素濃度的50-150%制定5個(gè)不同濃度梯度，分別是50%、80%、100%、120%、150%，每個(gè)濃度梯度平行制備3份樣品溶液，共15份樣品溶液，每份樣品都加入處方量輔料，用流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成規(guī)定濃度，即得系列供試品溶液。按上述色譜條件，分別進(jìn)樣20μL，記錄阿奇霉素峰面積，以濃度(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的阿奇霉素峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得回歸方程：Y=3.21e+003X - 5.36e+004 r=0.999758

　　結(jié)果表明：在467.70-1434.51µg·mL-1范圍內(nèi)，阿奇霉素濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系。

　　6 回收率試驗(yàn)

　　溶液制備同線性關(guān)系試驗(yàn)供試品溶液，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中阿奇霉素(C38H72N2O12)的含量，根據(jù)含量結(jié)果計(jì)算回收率，結(jié)果5種濃度回收率(n=3)分別為99.2%( RSD=0.5%),98.6%( RSD=0.9%),100.0%( RSD=0.3%), 101.2%( RSD=0.7%),100.7%( RSD=0.3%);平均回收率(n=15)為99.9%( RSD=1.1%)。說(shuō)明此方法得到的測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

　　7 精密度試驗(yàn)

　　7.1 重復(fù)性取同一批(063070521)阿奇霉素干混懸劑，按“3”項(xiàng)下方法制備所需溶液，平行測(cè)定6次的含量結(jié)果，RSD值為0.8%。

　　7.2 中間精密度取3批阿奇霉素干混懸劑，在不同時(shí)間，由不同的化驗(yàn)員，按“3”項(xiàng)下方法制備所需溶液分別測(cè)定，二人測(cè)定的同批含量結(jié)果的相對(duì)平均偏差

　　063070521為0.8%，063070301為0.6%，063070302為1.6%。

　　8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

　　按“3”項(xiàng)下配制對(duì)照品溶液和樣品溶液(批號(hào)：063070521)，每間隔1小時(shí)，精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，重復(fù)進(jìn)樣13次，量取主峰面積，計(jì)算幾次進(jìn)樣結(jié)果峰面積的RSD值。對(duì)照品溶液RSD為0.9%，樣品溶液RSD為0.8%，表明對(duì)照品溶液和樣品溶液至少在12h內(nèi)穩(wěn)定。

　　9 樣品測(cè)定

　　取3批阿奇霉素干混懸劑，按“3”項(xiàng)下配制對(duì)照品溶液和樣品溶液，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣20μL，按外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果與抗生素微生物法比較見(jiàn)下表

　　從表結(jié)果可看出本法與藥典采用的抗生素微生物效價(jià)法測(cè)定阿奇霉素干混懸劑的含量無(wú)顯著性差異。

　　10 討論

　　10.1 本文參考有關(guān)文獻(xiàn)[4]，對(duì)流動(dòng)相的組成進(jìn)行了探討，發(fā)現(xiàn)采用本文的流動(dòng)相即0.025mol·L-1的磷酸氫二鈉(pH 9.0)-乙腈(45：55)，峰形穩(wěn)定，分離較好。

　　10.2 溶劑的選擇由于阿奇霉素干混懸劑的輔料較多，故溶劑選擇比較困難。本法采用流動(dòng)相和乙腈試驗(yàn)對(duì)比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)均可溶樣，但因純乙腈毒性較大且價(jià)格較貴，故最后溶劑定為流動(dòng)相。

　　10.3 樣品濃度選擇采用阿奇霉素濃度為1mg·mL-1時(shí)峰形對(duì)稱，和相鄰雜質(zhì)峰分離較好;濃度過(guò)大，峰拖尾嚴(yán)重且輔料量大而不好過(guò)濾;濃度過(guò)小，準(zhǔn)確度受影響。

　　10.4 干擾試驗(yàn) 將溶劑和按處方工藝配制不含阿奇霉素的空白輔料，按“3”項(xiàng)下方法制備空白供試液，記錄色譜圖，結(jié)果顯示空白溶劑和空白輔料對(duì)本法測(cè)定無(wú)干擾。

　　10.5 測(cè)定條件流動(dòng)相的流速±0.05ml，柱溫度±5℃，乙腈相比例±5%，緩沖鹽pH±0.4等進(jìn)行小的變動(dòng)，系統(tǒng)適用性均能達(dá)到試驗(yàn)要求，說(shuō)明此方法適用范圍較廣。

　　所以，我們認(rèn)為本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，樣品溶液穩(wěn)定，可作為阿奇霉素干混懸劑含量測(cè)定方法之一。

　　參考文獻(xiàn)

　　[1]李榮凌，張先洲.阿奇霉素臨床應(yīng)用分析.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志2006年第26卷第9期

　　[2]張曄.高效液相色譜法測(cè)定阿奇霉素片的含量.中國(guó)藥業(yè)2006年第15卷第17期

　　[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[S].北京.化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄ⅪA

　　[4]The United States Pharmacopeial Convention.USP29-NF24 Page227

　　[5]International Conference on Harmonisation, ICH Harmonised Tripartite Guidelines, Q2A: Guideline on Validation of Analytical Procedures: Definitions and Terminology [FDA, March 1, 1995 (60 FR 11259)]

　　[6]International Conference on Harmonisation, ICH Harmonised Tripartite Guidelines, Q2B: Guideline on the Validation of Analytical Procedures: Methodology [FDA, May 19, 1997 (62 FR 27463)].

高效液相色譜法測(cè)定阿奇霉素干混懸劑含量

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