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稻草秸稈中木質素、纖維素測定方法的研討

稻草秸稈中木質素、纖維素測定方法的研討

測定木質素、纖維素含量的方法很多,如纖維素含量的測定方法有濃酸水解定糖法、硝酸乙醇法、氯化法等;木質素含量的測定方法有濃酸水解法、紫外分光光度法、紅外光譜定量分析法和同位素標記法。由于紅外光譜法和同位素標記法對實驗室要求較高,所以應用并不普遍。我們常用的是濃酸水解法。本試驗應用中性洗滌劑法、2MHCl 水解法、72 %H2SO4 水解法及灰化法綜合運用,一次性進行木質素、纖維素的測定,并將灰化時間縮短至3h ,所得結果較為準確�，F將方法介紹如下:

1 材料與方法

1.1 材料

稻草經機器粉碎成1cm 長細秸,粉碎成1cm 長稻草粉分別經Z17 、921 和1024 三種白腐真菌菌株發(fā)酵,每周取樣一次,共7 周。

1.2 主要試劑

中性洗滌劑:按Van Soest 方法配制;

2M 鹽酸溶液:167ml 濃鹽酸(比重1. 19) 用蒸餾水定溶至1000ml ;

72 %濃酸溶液: 665mlH2SO4 ( 比重1. 84 ) 加入300ml 水中,冷至20 ℃,補加水至1000ml。

1.3 方法

取經80 ℃3h 烘至衡重的三個菌株各5g。

1.3.1 取1. 0000g 樣品置于100ml 碘瓶中,加入70ml中性洗滌劑, 之后放入已沸的高壓鍋, 100 ℃保溫40min ,115～121 ℃保溫20min ,取出用3 號30ml 沙芯坩堝過濾至pH 6. 5～7. 0 ,依次用95 %乙醇、無水乙醇和丙酮洗滌2 次,將殘渣置真空干燥器中,干燥20min。

1.3.2 將殘渣連同坩堝置于100ml 燒杯中,加入70ml2M 鹽酸溶液, 然后放入已沸的高壓鍋, 100 ℃保溫50min ,過濾至中性,依次用95 %乙醇、無水乙醇和丙酮洗滌2 次,殘渣80 ℃烘至衡重為W1 。

1.3.3 將殘渣連同坩堝置于150ml 燒杯中,加入10ml致冷的72 %硫酸,20 ℃降解4h ,后加入90ml 蒸餾水,室溫過夜,次日用蒸餾水洗殘渣至pH 6. 5 ,烘干至衡重為

W2 ,W1 - W2 為纖維素的含量。

1.3.4 將殘渣在550 ℃馬福爐中灰化,干燥器中平衡至衡重為W3 ,W2 - W3 即為木質素的含量。

2 結果與討論

本測定方法是在原有方法基礎上加以改進,按照王玉萬(1987) 半纖維素、纖維素、木質素系統(tǒng)定量分析程序方法,纖維素測定前兩步同上面方法(1.3.1，1.3.2,1.3.3) 采用丙酮洗2 次,60 ℃干燥,然后置入100ml燒杯,加入10ml 72 % H2SO4 , 20 ℃水解3h , 然后加入90ml 蒸餾水,室溫過夜,次日用已稱恒重的3 號砂芯坩堝過濾,水洗殘渣至pH 6. 5 ,將濾液經適當稀釋,取1ml稀釋液加4ml 蒽酮試劑,100 ℃保溫10min ,于620nm 測OD 由葡萄糖標準曲線求出糖量,乘上系數0. 9 ,求得纖維素,將殘渣80 ℃烘干,干燥器冷卻30min ,稱重; 在550 ℃馬福爐中灰化4 小時,干燥器冷卻30min ,稱重,前者稱重數減去后者稱重數即為木質素含量。而經我們改進后的方法就直接按上面方法(1. 3. 3 ,1. 3. 4) ,所

測結果見表1 。

三個菌株的木質素由接種前含16. 63 %經49d 培養(yǎng)分別減少至9. 89 %、10. 30 %、10. 87 % ,纖維素含量由接種前含30. 35 % 經49d 培養(yǎng)后分別減少至23. 12 %、22. 72 %、25. 03 % ,說明木質素、纖維素含量都明顯減少,同我們以往所做的分析結果基本相似。并且有以下幾方面優(yōu)點: ( 1) 節(jié)約試劑: 按照王玉萬(1987) 方法,纖維素含量的測定需要蒽酮試劑,并且蒽酮試劑需要現配現用,相對來說我們的方法比較簡便,同時減輕了工作量; (2) 減少人員,節(jié)約電源:王玉萬的方法灰化需要4h ,現在只要3h 就可灰化好。而且所測結果同以往我們所做的分析結果基本相似。說明在不

考慮酸溶木質素含量和不需了解培養(yǎng)物中木質素、纖維素的絕對含量時,本測定方法是可行的。