可樂、咖啡、茶葉中咖啡因的高效液相色譜分析
可樂、咖啡、茶葉中咖啡因的高效液相色譜分析
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/STRONG>：
⑴ 了解液相色譜的原理和應(yīng)用
⑵ 握標(biāo)準(zhǔn)曲線定量法
二、實(shí)驗(yàn)原理：
咖啡因又稱咖啡堿，屬黃嘌呤衍生物，化學(xué)名稱1,3,7-三甲基黃嘌呤，可由茶葉或咖啡中提取而得的一種生物堿。它能興奮大腦皮層，使人精神興奮。咖啡中含咖啡因1.2%-1.8%，茶葉約含2.0%-4.7%�？蓸�、APC藥片中均含有咖啡因。其分子式為C8H10O2N4，結(jié)構(gòu)式：
樣品在堿性條件下，用氯仿定量提取，采用反相液相色譜柱進(jìn)行分離，以紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，以咖啡因標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的色譜峰面積對(duì)其濃度作工作曲線，再根據(jù)樣品中的咖啡因面積，由工作曲線算出濃度。
三、 實(shí)驗(yàn)儀器與藥品
⑴儀器
LC7000液相色譜儀 Clarity工作站 色譜柱(EconosphereC18) 平頭微量進(jìn)樣器
⑵藥品
① 甲醇(色譜純) 雙蒸水 氯仿(A.R) 1mol/LNaOH;NaCl(A.R.) Na2SO4(A.R.)
咖啡因(A.R.) 可口可樂(1.25L瓶裝) 雀巢咖啡 茶葉
②1000mg/L咖啡因儲(chǔ)備液 將咖啡因在110℃下烘干1小時(shí)，準(zhǔn)確稱取0.1000g咖啡因，用氯仿溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，定容至刻度。
四、實(shí)驗(yàn)步驟：
⑴ 色譜條件：
柱溫：室溫
流動(dòng)相：甲醇/水=60：40
流量：1.0mL/min
檢測(cè)波長(zhǎng)：275nm
⑵ 咖啡因標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制：分別用吸量管吸取0.40、0.60、0.80、1.00、1.20、1.40mL咖啡因儲(chǔ)備液于六只容量瓶中，用氯仿定容至刻度，濃度分別為40、60、80、100、120、140mg/L
⑶ 樣品處理：
①將100mL可口可樂置于250mL燒杯中，劇烈攪拌30min或用超聲波脫氣5min，以趕凈二氧化碳。
②準(zhǔn)確稱取咖啡0.25g，用水溶解定容至100mL。
③準(zhǔn)確稱取茶葉0.3g,加蒸餾水30mL煮沸10min，冷卻后將清液轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶，并按此操作重復(fù)兩次，定容至刻度。將3份樣品溶液分別進(jìn)行干過濾，棄去前過濾液，取后面的過濾液。
④分別取上述三份樣品溶液25.0mL于125mL分液漏斗中，加飽和氯化鈉溶液，溶液，然后用氯仿分三次萃取。將氯仿提取液分離后經(jīng)裝有無(wú)水硫酸鈉小漏斗，過濾至容量瓶中，最后用少量氯仿多次洗滌小漏斗，定容至刻度。
⑷繪制工作曲線：待液相色譜儀基線平直后，分別注入咖啡因標(biāo)準(zhǔn)系列溶液10μl，重復(fù)兩次，要求兩次所得的咖啡因色譜峰面積基本一致，記下峰面積與保留時(shí)間。
⑸樣品測(cè)定：分別注入樣品溶液10μl，根據(jù)保留時(shí)間確定樣品中咖啡因色譜峰的位置，重復(fù)兩次，記下咖啡因色譜峰峰面積。
五、結(jié)果處理：
⑴根據(jù)咖啡因標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的色譜圖，繪制咖啡因峰面積與其濃度的關(guān)系曲線。
⑵根據(jù)樣品中咖啡因色譜峰的峰面積，由工作曲線計(jì)算可口可樂、咖啡、茶葉中咖啡因含量(分別用mg/L、mg/g和mg/g表示)
六、注意事項(xiàng)：
⑴液體樣品必須經(jīng)過萃取處理，不能直接進(jìn)樣，雖然操作簡(jiǎn)單，但會(huì)影響色譜柱的壽命。
⑵不同牌號(hào)的茶葉、咖啡中咖啡因含量不大相同，稱取樣品可酌量增減。
⑶若樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液需要保存，應(yīng)置于冰箱。
⑷樣品和標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)樣量要嚴(yán)格保持一致。
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