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液相色譜-質譜聯(lián)用技術同時測定嬰幼兒配方奶粉中甲基香蘭素和乙基香蘭素

液相色譜-質譜聯(lián)用技術同時測定嬰幼兒配方奶粉中甲基香蘭素和乙基香蘭素

摘要 建立了食品中甲基香蘭素和乙基香蘭素的高效液相色譜-單四極桿質譜聯(lián)用測定方法。該方法樣品經酸沉蛋白后,以SB-C18柱(2.1×50 mm, 3.5μm)分離，流動相為甲醇和水(33:67，V/V)，電噴霧負離子MRM模式檢測。該方法的檢出限0.1mg/kg，線性范圍0.01-1.0μg/mL，加標回收率80.0%～84.1%，相對標準偏差分別為1.55%和1.81%。

關鍵詞 液質聯(lián)用儀，嬰幼兒配方奶粉，甲基香蘭素，乙基香蘭素

0 前言

香蘭素是重要的食品添加劑,其被廣泛用作糖果、餅干、糕點、飲料等食品的增香劑 。香蘭素主要包括甲基香蘭素和乙基香蘭素。最近，衛(wèi)生部公布《食品用香料、香精使用原則(征求意見稿)》，明確把純乳等20種食品列為禁加食用香料香精范圍，其中嬰兒配方食品、較大嬰兒和幼兒配方食品也擬被“禁香”，而香蘭素是嬰幼兒配方奶粉經常添加的增香劑，但是還沒有國標方法，因此,建立靈敏、準確、快速的嬰幼兒配方奶粉中香蘭素檢測方法,為執(zhí)法提供技術鑒定依據(jù),是當務之急。

目前,國內外測定香蘭素的方法主要有光度法、高效液相色譜法、電化學法等[1][2]，這些方法只能定量，不能準確定性，可能會造成假陽性的測定結果。本文將樣品經酸沉蛋白后,通過液相色譜-質譜聯(lián)用技術對其進行準確的定性定量測定,獲得較滿意的結果。

1 材料與方法

1.1 實驗儀器，試劑，樣品

1.1.1 儀器

液相色譜-串聯(lián)質譜儀： LC7000型液相色譜儀(海能儀器公司，中國);配ExpressionCMS型單四極桿質譜(Advion公司，美國); Milli-Q去離子水發(fā)生器(Milli-Q公司，美國)。

1.1.2 試劑

乙腈：色譜純。

冰醋酸、鹽酸、氫氧化鈉：北京化工廠。以上均為分析純。

甲基香蘭素和乙基香蘭素：北京化學試劑公司。

1.1.3樣品

嬰幼兒配方奶粉購自本地超市。

1.2 分析條件

1.2.1 色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18柱：3.5 μm，2.1mm×50mm;流速：0.25 mL/min;柱溫：35℃;進樣量：10μL;流動相：甲醇+水(33：67，V/V)。

1.2.2 質譜條件

離子源：電噴霧離子源(ESI);掃描方式：負離子掃描;檢測方式：多反應檢測;干燥氣：N2 ;霧化氣壓力：275.8 kpa;干燥氣溫度：340 ℃;干燥氣流速：8 L/min。甲基香蘭素和乙基香蘭素質譜分析的條件參數(shù)如下表1：

1.3 樣品處理

準確稱取5.0 g樣品，用25.0 mL 50℃熱水溶解，超聲10min，用5 mol/L鹽酸溶液調節(jié)pH值至1.7，放置2 min后，再用2.5 mol/L氫氧化鈉溶液調節(jié)其pH值至4.5。將樣品溶液移至50 mL容量瓶中，用水定容至刻度后，倒入漏斗用快速定性濾紙自然過濾，棄去最初濾液，在50 mL錐形瓶中收集濾液，濾液過0.20µm濾膜后，供液相色譜-單四級桿質譜儀分析。

2 結果與討論

2.1 前處理方法的優(yōu)化

嬰兒配方奶粉中蛋白質含量較高，因此，本方法先用50℃熱水超聲提取，再經酸沉蛋白后直接用測定。實驗證明，該法操作簡單，易于推廣，加標回收率大于80.0%，可以滿足嬰兒配方奶粉中的香蘭素日常檢測要求。

2.2質譜條件的優(yōu)化

采用直接進樣方式分別將濃度為100 ng/mL的甲基香蘭素和乙基香蘭素標準溶液分別注入離子源中，在負離子檢測方式下進行母離子全掃描，得到甲基香蘭素和乙基香蘭素的準分子離子峰。再對得到的甲基香蘭素和乙基香蘭素的質譜參數(shù)破碎電壓進行優(yōu)化，使甲基香蘭素和乙基香蘭素的定性離子與定量離子產生的離子對強度比例達到最大時為最佳，得到甲基香蘭素和乙基香蘭素的最佳質譜參數(shù)(如表1所示)。

2.3 色譜條件的優(yōu)化

　　甲基香蘭素和乙基香蘭素屬于中等極性化合物，為了有利于色譜峰的分離及鋒形的改善，本方法分別采用ZORBAX Eclipse XDB-C18柱、ZORBAX Eclipse SB-C18和ZORBAX SB-Aq柱進行分離試驗，發(fā)現(xiàn)SB-C18柱，采用甲醇-水(33：67，V/V)為流動相進行梯度洗脫分離效果較好。0-3 min主要是洗脫樣品測定液中極性較強的雜質;3-9min主要是洗脫樣品測定液中目標化合物。圖1為加標樣品總離子流圖，從圖中可以看出甲基香蘭素和乙基香蘭素得到較好的分離。

2.2 標準曲線線性范圍和方法檢測限

將逐級稀釋的標準工作液分別進樣5μL，測定結果經線性回歸，線性范圍、回歸方程(y為峰面積，Counts;x為濃度，ug.L-1)相關系數(shù)和檢出限見表2。

注：進空白樣,以基線3倍噪聲值在標準曲線查得結果計算, 按測定方法計算,得到方法檢出限。

2.3 方法的回收率和精密度

稱取空白樣品6份,每份5.0 g, 分別添加成濃度為0.1mg/kg 或1.0 mg/kg的待測樣品,按供試品制備方法制備后,進行測定, 結果見表3。從表3中的回收率及精密度數(shù)據(jù)可以看出，甲基香蘭素和乙基香蘭素的加標回收率在80.0%～84.1%之間，平均相對標準偏差分別為1.55%和1.81%(n=8)，滿足試驗要求。

3 結論

建立了嬰幼兒配方奶粉中甲基香蘭素和乙基香蘭素的高效液相色譜質譜測定方法。該法樣品經酸沉蛋白后，樣品提取液經C18反相色譜柱進行有效分離，電噴霧離子化，單四級桿質譜檢測。甲基香蘭素和乙基香蘭素的品加標回收率80.0%-84.1%,平均相對標準偏差分別為1.55%和1.81%(n=8), 適用于嬰幼兒配方奶粉中甲基香蘭素和乙基香蘭素的快速測定。